SM-102 是一种氨基阳离子脂质，可用于形成脂质纳米颗粒 (LNPs)。SM-102 具有更高的转染效率。SM-102 在脂质纳米颗粒传递 mRNA 治疗药物和疫苗的有效性中发挥重要作用。SM-102 (100 —— 300µM, 1 min) 浓度依赖性地抑制 GH3 细胞的erg介导的K+电流(i k (erg))。

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　　生物活性

　　体外研究

　　脂质纳米颗粒的制备

　　在这里，我们提供FDA批准的mRNA-1273（一种COVID-19 mRNA疫苗）中LNPs的脂质摩尔比例。该配方中脂质的摩尔比例为SM-102：DSPC：胆固醇：DMG-PEG 2000 = 50：10：38.5：1.5[1]，RNA与脂质的重量比例为0.05 (wt/wt)。

　　A. 脂质混合物制备

　　1、将脂质溶解在乙醇中，制备10mg/m的储备溶液。脂质储备溶液可以存储在−20°C以便后续使用。

　　注意事项1：离子化脂质通常为液体。由于其黏度，应始终称量而不是依赖自动移液器的体积。

　　注意事项2：溶液中的胆固醇应保温(>37℃)以保持流动性。迅速转移胆固醇溶液以避免冷却。

　　2、按照描述准备脂质混合溶液。对每毫升的脂质混合物添加: 572 µL的10mg/mL SM-102(HY-134541)、240 µL的10mg/mL胆固醇(HY-N0322)、127 µL的10mg/mL DSPC(HY-W040193) 和 61 µL的DMG-PEG 2000 (HY-112764)。彻底混合溶液以达到清澈的溶液。这个混合物含有10毫克的总脂质。

　　注意事项3：脂质和比例的选择可以根据需要更改，这将影响LNP的性质（大小，多样性，有效性）以及所需的mRNA的量。

　　B. mRNA制备

　　1、用100 mM pH 5的醋酸钠缓冲液制备166.7 µg/mL的mRNA溶液。

　　注意事项4：脂质:mRNA重量比影响包封效率。可以准备其他重量比作为替代配方，并应由用户相应调整。

　　C. 混合

　　有三种常用的快速混合溶液的方法：移液管混合法，漩涡混合法和微流控混合法。所有这些混合方法都可以用于各种应用。

　　重要的是要注意，移液管混合方法和漩涡混合法可能产生更多的异质LNPs，并且封装效率较低，易变化。微流控设备能够以高度可控、可重复的方式进行快速混合，从而实现均匀的LNPs和高封装效率。在这些设备中，醇脂质混合物与水溶液被迅速地结合在单个流中。当两个流混合时形成LNPs，然后收集到一个收集管中。

　　1、吸管混合法：

　　1.1. 吸取3毫升mRNA溶液，迅速加入到1毫升脂质混合溶液中（通常使用醇脂混合物与水相缓冲液的1:3比例）。快速上下吸取20-30秒。

　　1.2. 将得到的溶液在室温下孵育最多15分钟。

　　1.3. 混合后，将LNPs对PBS（pH 7.4）进行透析2小时，然后使用0.2微米过滤器无菌过滤，并储存于4°C。

　　2、涡旋混合法：

　　2.1. 在涡旋混合器上以适中的速度涡旋3毫升的mRNA溶液。然后，迅速将1毫升的脂质混合溶液加入到涡旋的溶液中（通常使用醇脂混合物与水相缓冲液的1:3比例）。继续涡旋得到的分散体另外20-30秒。

　　2.2. 将得到的溶液在室温下孵育最多15分钟。

　　2.3. 混合后，将LNPs对PBS（pH 7.4）进行透析2小时，然后使用0.2微米过滤器无菌过滤，并储存于4°C。

　　3、微流体混合法：

　　3.1 mRNA缓冲溶液3毫升和脂质混合物溶液1毫升在微流体设备中以总流量12 mL/min混合（通常使用醇脂混合物与水相缓冲液的1:3比例）。

　　注释5：可以更改流量比率和总流量等参数来进行LNPs的微调。

　　3.2. 混合后，将LNPs对PBS（pH 7.4）进行透析2小时，然后使用0.2微米过滤器无菌过滤，并储存于4°C。