pH荧光探针BCECF, AM-技术前沿-资讯-生物在线

pH荧光探针BCECF, AM

作者:西安百萤生物科技有限公司 2018-10-29T09:50 (访问量:3969)

基本信息

货号:212021 mg

储存条件:-20℃避光

简介

细胞内pH在许多细胞事件中起着重要的调节作用,包括细胞生长,钙调节,酶活性,受体介导的信号转导,离子转运,内吞作用,趋化性,细胞粘附和其他细胞。近年来,pH敏感性荧光染料已被广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术还允许研究人员使用其他技术(如微电极)实现更大的空间分辨率和采样密度来研究这些过程。其中,2'7'-- 2-羧乙基)-5-(和-6- 羧基荧光素(BCECF)是最常用的pH探针,因为它可用于比率监测细胞pHBCECF AMBCECF的细胞渗透型。 AAT Bioquest开发了一种更好的版本,单一异构体化合物BCFLAM使得pH测量比BCECFAM更加可重复,它由相当多的不同异构体组成。

物理化学特性

分子量:~808.69

溶剂:二甲基亚砜(DMSO

光谱特性:Ex / Em = 503 / 528nm

标准细胞的测定方案

在生长培养基中制备细胞®

添加等体积的BCECFAM染料上样溶液(100μL/孔用于96孔板)在37℃下孵育1小时®

洗涤并用HHBS替换®

读取荧光,在Ex / Em = 490 / 535 nm,加入50μL/孔化合物(或505/535430/535 nm比例)

注意:以下是标准单元负载的推荐步骤。 该步骤仅提供指导,应根据具体需要进行修改。

1.根据需要准备细胞。 例如,将粘附细胞在生长培养基中以40,00080,000个细胞//100μL过夜,96孔或10,00020,000个细胞//25μL,用于384孔板。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定最佳细胞密度。

2.准备BCECFAM染料加载溶液:

2.1在高质量无水DMSO中制备220 mM BCECFAM原液。 应立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20 oC重新冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

2.2Hanks20 mM Hepes缓冲液(HHBS)中制备5-50 uM BCECFAM染料加载溶液

3.运行pH分析

3.1100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)BCECFAM染料加载溶液加入细胞板(来自步骤2.3)。

注意:如果您的化合物干扰血清,重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基(96孔板100μL/孔或染料加载前384孔板25μL/孔)。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育3060分钟。

3.3HHBS洗涤并更换染料加载溶液。

3.4使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.5通过监测Ex / Em = 490 / 535nm(在515nm处截止)或505 / 535nm430 / 535nm(在515nm处截止)处的荧光进行pH测定以进行比率测量。 添加化合物为50μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)。

注意:化合物应在化合物添加后35分钟内完成,但在测定开发过程中建议至少8分钟的数据收集。

西安百萤生物科技有限公司 商家主页

地 址: 西安市高新区草堂科技产业基地秦岭大道西6号科技企业加速器二区9幢2单元20401号房

联系人: 第五经理

电 话: 029-68064558

传 真: 029-68064558

Email:info@tjbiolite.com;zx@tjbiolite.com

相关咨询
ADVERTISEMENT