抗体有时会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分,因为疏水作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面的抗体受体。比如说,
IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16、CD32和CD64等。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来阻断。Fc受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。所以一个抗体非特异性相互作用及与Fc受体结合的情况,都可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照,即同型对照。那么如何选择同型对照呢?
1、 一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。比如抗人的CD56 FITC标记的抗体,成份是MouseIgG1,κ,那么它的同型对照应该是FITC标记的MouseIgG1,κ。
2、如果抗体是组合形式,如纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体,成分是Mouse IgG1,κ,它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ,它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下:样本管:纯化的CD86+PE标记的抗小鼠
IgG1(二抗)+样本,同型对照管:纯化的同型对照+PE标记的抗小鼠IgG1(二抗 )+样本。
3、如果没有找到完全匹配的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同。比如,某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果找不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а;如果也没有找到Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b;如果最后还是没有找到Mouse IgG2b,那么选择相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。
以下是联科生物同型对照抗体列表,供选择。
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